顯微操縱器采用顯微操作系統(tǒng)將供體物直接注入宿主細胞中,研究供體物的功能或者獲得轉基因動植物的技術。顯微操作時顯微鏡的觀察方式通常選擇浮雕相襯觀察方式,原因在于浮雕相襯系統(tǒng)能夠產(chǎn)生高反差的3D圖像,便于微操作手對樣品精準的三維空間捕獲及操控,如在細胞核膜可以更容易看到的情況下進行穿刺。在使用顯微操縱器的使用我們要注意什么呢?
1、在整個過程中,注射針尖應遠離人員和實驗室中的儀器。注射針在持針器上安裝不牢時,注射器、管子及注射針內(nèi)的壓力,可能將注射針射出。
2、在反向充填液體時,適當?shù)卦陲@微鏡下觀察注射針尖,以決定在加壓時是否注射針阻塞或偏斜。阻塞通常可通過將針尖輕輕敲擊一個固定物而得以緩解。針尖偏斜的注射針是適合于顯微注射的,但其使用應做細微調(diào)整或補償注射中加壓所造成的額外偏斜。
3、注射速度過快能擾亂細胞質(zhì)成分,細胞裂解或細胞從底層移位。當注射體積小于估計的細胞體積的10%,并且注射樣品的流動速度幾乎不導致可見的細胞質(zhì)移位時,注射效果好。
4、用紫外光可看到注入標記物后的活細胞,但會對細胞造成不可恢復的損傷,因此應盡可能縮短紫外光照射時間。
5、如果對已經(jīng)注射的細胞進行免疫熒光測定或其他處理,最好使用可固定的葡聚糖,以防在沖洗中造成標記物的擴散損失。